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1928年，南京国民政府以原国立武昌中山大学为基础，改建国立武汉大学，下设文、法、理、工4个学院。 1929年2月，法学家王世杰成为国立武汉大学首位正式校长。他认为国立武汉大学不能满足于拥有的4大学院，提出要把学校办成拥有文、法、理、工、农、医6大学院的万人大学。

1930年3月，国立武汉大学新校舍一期工程正式开工。1932年3月，学校由东厂口迁入珞珈山新校舍。

1932年，由武昌东厂口迁入珞珈山新校舍。

1934年，武汉大学首开中国女大学生游泳课先河，结束了封建社会禁止女大学生游泳的历史轰动全国。同年武汉大学体育由于成绩显著曾受到民国教育部表扬并通令全国大专院校，授予时任体育、卫生主任为教会大学、清华大学、南开大学、武汉大学等高校体育教学方案执行人。

武汉大学1935年，学校开办研究生教育。

1936年，学校成立农学院，从而发展成为有文、法、理、工、农5个学院15个系2个研究所的综合大学。

1937年，国立武汉大学与国立中央大学（1949年更名南京大学）、国立清华大学、国立北京大学和国立浙江大学统一进行招生考试，从而跻身“民国五大名校”。同年7月7日，日军在北平西南的卢沟桥附近发动七七事变，揭开了日本全面侵华战争的序幕。此后上海、南京相继被日军占领，武汉成为中国的战时首都，国共两党大量政治军事人士云集珞珈山校园指挥对日抗战。